原发性非小细胞肺癌(NSCLC)中MTS2/p15基因丢失的研究
作者：许凯黎 廖美琳 丁嘉安 周 瑾 钟晓松 陆明华
单位：许凯黎 周 瑾 钟晓松 陆明华(上海市肿瘤研究所(上海200032)；廖美琳(上海市胸科医院)；丁嘉安(上海市第一肺科医院)
关键词：肺肿瘤；癌，非小细胞肺；PCR；基因，p15；染色体缺失
肿瘤990101 目的 探讨MTS2/p15基因缺失与人体非小细胞肺癌(NSCLC)的发生及发展的相关性。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)技术，分别检测160例不同病理类型及分期的肿瘤组织，10例非癌性肺组织及2例胎肺组织中p15基因的纯合性丢失。 结果 160例NSCLC组织中p15基因的丢失率以腺癌为最高64.7%，鳞癌其次43.9%，混合型鳞腺癌为最低37.0%，10例非癌性肺组织及2例胎肺组织均未见有p15基因的丢失。经TNM分期分析表明，Ⅰ期p15基因丢失率为34.6%，Ⅱ期为47.4%，Ⅲ期为61.4%，Ⅲ期的p15丢失率明显高于Ⅰ期(P<0.005)。 结论 MTS2/p15基因缺失除与NSCLC的发生相关外，还可能涉及到患者病程的进展。
, 百拇医药
HOMOZYGOUS DELETION OF MTS2/p15 GENE IN
PRIMARY NON-SMALL CELL LUNG CARCINOMA
Xu Kaili,Liao Meilin,Ding Jiaan,et al.Shanghai Cancer Institute,Shanghai,200032
Objective：To investigate the relationship between clinicopathologic feature and homozygous deletion of p15 gene in non-small cell lung cancer.Methods：160 cases with non-small cell lung cancer,10 cases with benign lung diseases and 2 cases with fetal lung tissues were examined by polymerase chain reaction-based analysis for homozygous deletion of MTS2/p15 gene.Results：The rate of p15 gene deletion was 49.3% in non-small cell lung cancer,including 64.7% in adenocarcinoma,43.9% in squamous carcinoma and 37.0% in mixed adeno-squamous carcinoma,but none of p15 gene deletion occured in benign lung diseases and fetal lung.Interestingly,there was a relationship between the stage of clinical pathology and the rate of p15 gene deletion.Among them,the rate of p15 gene deletion in NSCLC was 34.6% in stage Ⅰ,47.4% in stage Ⅱ and 61.4% in stage Ⅲ (P<0.05).Conclusion：A lack of p15 gene was observed frequently in adenocarcinoma than in squamous cell carcinoma and was found to be closely related to clinical stages of NSCLC.
, 百拇医药
Key words Lung neoplasms Carcinoma,non-small cell lung PCR Genes MTS2/p15 Chromosome deletion
癌基因的激活和抑癌基因的失活与恶性肿瘤的发生之间的相关性，现已成为肿瘤分子生物学研究的热点。通过人体肺癌的发生及发展的细胞遗传学并结合分子生物学研究，已充分揭示肿瘤细胞中多对染色体上频繁发生丢失，如3p，4p,5p,9p,11p,13p和17p,其中以3p，9p和17p尤为突出。最近，人们从染色体9p21区域处分离出两个细胞周期素依赖性激酶抑制因子的新成员，p16(MTS1)和p15(MTS2)基因，并发现p16基因丢失可能与家族性人体黑素瘤演变相关[1，2]。继后，在多种肿瘤细胞株和原发性肿瘤中相继观察到p15、p16基因发生纯合性丢失，从而提示p15、p16基因可能为人体多种肿瘤发生相关的抑癌基因。近年文献报道人体肺癌细胞株及原发性非小细胞肺癌中p16基因均可发生变异，并与NSCLC患者病程进展相关[3～8]。然而，对于人体原发性NSCLC手术标本中p15基因的丢失仍少见报道。为此，本文采用PCR法，检测及分析上海地区经病理证实的160例NSCLC组织中p15纯合性丢失，以期比较研究NSCLC病理分型及临床分期与p15基因丢失的相关性。
, 百拇医药
材料与方法
一、组织标本来源
组织标本分别来自上海市胸科医院，上海市第一肺科医院，华东医院。新鲜手术切除标本在1小时内存放于液氮保存。经病理证实的160例非小细胞肺癌组织(其中包括鳞癌82例，腺癌51例及混合性鳞腺癌27例)，10例非癌肺疾患组织及2例胎肺组织，在作DNA大分子纯化前均放于液氮条件下冻存。
二、主要试剂
琼脂糖(Promega公司)，dNTP，Taq酶及DNA标准分子量Marker(华美公司)。p15 Exon 2及β-actin引物均由中科院细胞生物学研究所合成。
三、DNA纯化及PCR扩增
(一)DNA纯化 参照Maniatis法分别纯化各种组织DNA大分子，经紫外分光光度计作DNA定量检测。
, 百拇医药
(二)PCR扩增及p15基因外显子(Exon 2)丢失检测
1.PCR反应总体积为50 μl，样本DNA量为4 μl，94℃变性5 min后，进行35个循环，条件为94℃，30 s；55℃，30 s；72℃，30 s，扩增p15基因的外显子(Exon 2)。p15基因Exon 2引物序列如下：
sense 5′-TGGCTCTGACCACTCTGC
antisense 5′-AGCGAATTCGGGTGGGAAATTGGGGTAAGAA
同时用β-actin基因作为内对照，扩增条件：94℃变性5 min后，进行35个循环，条件为：94℃，30 s；55 ℃，2 min，72℃，3 min。
β-actin引物序列为：
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sense 5′-GAAACTACCTTCAACTCCATC
antisense 5′-CTAGAAGCATTTGCGGTGGACGATGGAGGGGCC
2.PCR扩增产物电泳检测：
p15基因外显子2及β-actin经PCR扩增后，产物在1.5%琼脂糖凝胶条件下进行电泳，凡检测标本中出现β-actin基因条带而p15基因条带消失者为纯合性丢失，两者均呈现条带为无丢失。
四、统计学分析：组间均值比较用t检验。
结 果
一、NSCLC组织病理分型及TNM分期：
本文收集原发性非小细胞肺癌组织总共为160例，其组织学分类及TNM临床分期(见表1)。
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表1 原发性NSCLC组织的病理分型及临床分期 分期
鳞癌
腺癌
混合型鳞腺癌
合计
Ⅰ
25
20
7
52
Ⅱ
18
11
, 百拇医药
9
38
Ⅲ
39
20
11
70
合计
82
51
27
160
二、不同组织病理类型中p15基因纯合性丢失
, 百拇医药
采用PCR法分别对160例原发性NSCLC，10例非癌性肺疾患以及2例胎肺组织纯化其大分子DNA，作p15基因(外显子2)及内对照β-actin的基因扩增检测。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，可观察到p15基因产物分子量为291 bp以及β-actin基因分子量为285 bp(见附图)。经上述标本检测结果提示160例NSCLC中79例出现p15基因纯合性丢失，总丢失率为49.3%，其中以腺癌为最高，丢失率达64.7%(33/51)，鳞癌为43.9%(36/82)，而混合型鳞腺癌为37.0%(10/27)，10例非癌性肺癌疾患及2例胎肺均未见有丢失(见表2)。表2 不同病理分型的NSCLC及非癌肺组织中p15基因纯合性丢失 分型
例数
p15纯合性丢失
例数
百分数
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腺癌
51
33
64.7
鳞癌
82
36
43.9
混合型鳞腺癌
27
10
37.0
总计
, 百拇医药 160
79
49.3
非癌性肺疾患
10
0
0
胎肺
2
0
0
附图 PCR法检测非小细胞肺癌组织中p15基因丢失
, 百拇医药
M 分子量，1正常肺组织，2～7号均为NSCLC，其中2，5，7号标本出现p15基因丢失
三、NSCLC的TNM分期与p15基因纯合性丢失的相关性研究
根据WHO标定之NSCLC中TNM分期，本文中160例NSCLC中Ⅰ期为52例，Ⅱ期为38例及Ⅲ期为70例，经PCR扩增检测NSCLC各TNM分期中p15基因丢失率，结果表明Ⅰ期丢失率为34.6%(18/52)，Ⅱ期为47.3%(18/38)，而Ⅲ期为61.4%(43/70)，从而证实NSCLC患者TNM分期与p15基因纯合性丢失呈正相关。晚期患者(Ⅲ期)中p15基因丢失率明显高于早期患者(Ⅰ期)，经统计学处理两者有显著性差异(P<0.005)(见表3)。
表3 p15基因在160例不同临床分期的NSCLC中纯合性丢失 分期
例数
, 百拇医药
p15基因丢失
例数
百分数
Ⅰ期
52
18
34.6
Ⅱ
38
18
47.3
Ⅲ
70
, 百拇医药 43
61.4*
*P<0.005
讨 论
近20年来，随着肿瘤分子生物学的深入研究，使人们充分地认识到正常细胞向肿瘤细胞演变的基础，在于细胞内某些癌基因的激活及抑癌基因的失活。因此，当前人们不但要进一步寻找某些与肿瘤相关的新的基因，同时还需深入探讨某些已知基因在各种肿瘤发生及发展中的作用。 1994年以来，p16，p15基因分别从人体染色体9p21-22区处分离及纯化，并发现该基因属CDK4和CDK6(cyclin-dependent kinase)的抑制因子，称为MTS1及MTS2。基因表达产物可与CDK4-cycline D复合物结合，使CDK4激活功能丧失，阻滞细胞进入G1/S期，抑制细胞生长。经采用PCR及Southern印迹法分析已充分证实p16基因在黑素瘤、神经胶质瘤、肺癌、食管癌、白血病和卵巢癌中存在缺失。显然缺失p16，p15基因均可促使细胞无限制地进入G1/S期并加快细胞分裂，最终导致细胞永生化而形成肿瘤细胞。
, 百拇医药
1995年，Washimi等人[3]采用PCR及PCR-SSCP法，首次证实非小细胞肺癌细胞株及原发性非小细胞肺癌组织均可出现p16、p15基因的纯合性丢失，但在小细胞肺癌细胞株中却未见丢失。鉴于该两基因影响细胞分裂的功能主要是通过Rb基因，而小细胞肺癌中Rb基因均出现突变型，因而小细胞肺癌的演变有可能与p16，p15基因的缺失无关。本文拟通过PCR法检测上海地区不同病理分型及分期的160例非小细胞肺癌组织中p15基因的纯合性丢失，以期阐明中国人肺癌发生及发展与p15基因变异之间的相关性，实验研究结果提示160例NSCLC中出现p15基因总纯合性丢失率可达49.3%，而10例非癌性肺疾患及2例胎肺组织中均未见有丢失，从而证实NSCLC演变与p15基因的丢失密切相关。经病理组织类型分析表明腺癌中p15基因丢失率为最高，达64.7%，其次为鳞癌，43.9%，而混合型鳞腺癌为最低，37.0%。肿瘤病因学资料提示肺鳞癌的发生与吸烟相关，而腺癌与吸烟关系不大，因而p15基因的缺失与吸烟及其它因素之间的相关性研究，尚须今后深入探讨。
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据文献探讨p15、p16基因产物可起到比p53基因更为有效的一种控制癌细胞分裂的“闸”的作用，因而在癌细胞中出现p15、p16基因的丢失，必然可导致细胞分裂速率增加及促进癌细胞的转移。Kratzke等人[4]曾观察到NSCLC手术标本中出现p16基因的纯合性丢失均与患者预后差密切相关。Kelly[6]等更进一步发现来自于Ⅲ及Ⅳ期之NSCLC细胞株中明显出现p16基因的纯合性丢失，而Ⅰ，Ⅱ期却少见p16基因丢失。这与本文的实验结果完全相符，p15基因的纯合性丢失频率与肺癌的分期相关，其中Ⅰ期为34.6%，Ⅱ期为47.4%，而Ⅲ期可高达61.4%，Ⅲ期明显地高于Ⅰ期并具有极其显著性的差异(P<0.005)。最近，Taga等人[8]采用免疫组化法，检测115例NSCLC标本中p16基因产物表达的阴性率明显与预后相关(P<0.043)，其中早、中期的患者之间差异最为明显(P<0.039)。由此可见，通过检测原发性NSCLC组织标本中p16，p15基因的缺失在一定程度上可反映患者的病程，并有可能为今后直接应用于临床，作为一种预测NSCLC患者预后的肿瘤标志。
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然而，尽管人们普遍认为p16基因与p15基因两者在NSCLC中可出现共同丢失的现象[7]，但考虑到该两种基因在各种肿瘤类型中存在不同的变异[9]，因此两者之间在NSCLC发生及发展中功能的差异还有待于深入探讨和研究。
上海市医学领先学科 上海市科委资助课题
第一作者简介 许凯黎，男，大学本科，研究员，硕士生导师。
参 考 文 献
1 Kamb A,Gruis A,Feldhaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science,1994,264(15):436
2 Hussussian CT,Rinder LK,Daik DF, et al. Germline p16 mutations in familiar melanoma.Nature Genet,1994,8:15
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3 Washimi O,Nagatake M, Osada H, et al. In vivo occurrence of p16(MTS1) and p15(MTS2) alterations preferentially in non-small cell lung cancers.Cancer Res,1995,55:514
4 Kratzke RA,Greatens TM,Rubins JB,et al. RB and p16INK4a expression in resected non-small cell lung cancer.Cancer Res,1996,56:3415
5 钟晓松，许凯黎，廖美琳，等.原发性非小细胞癌p15基因的丢失研究.肿瘤.1997，17(2)：81
6 Kelley MJ,Nakagawa K, Steinberg SM, et al. Differential inactivation of CDK2 an RB protein in non-small cell lung cancer cell lines.J Natl Cancer Inst,1995,87(10):756
, 百拇医药
7 Okamotot A,Hussain SP,Hagiwara K, et al. Differential inactivation of CDK2 an RB protein in non-small cell lung cancer cell lines.J Natl Cancer Inst,1995,87(10):756
8 Taga S,Osaki T,Ohgami A, et al. Prognostic value of the immunohistochemical detection of p16INK4 expression in nonsmall cell lung carcinoma.Cancer,1997,80(3):389
9 Herman GJ, Jen J,Merlo A,Baylin SD.Hypermethylation-associated inactivation indicates a tumor suppressor for p15INK4B1.Cancer res,1996,56:722
(收稿：1998-10-16), http://www.100md.com
单位：许凯黎 周 瑾 钟晓松 陆明华(上海市肿瘤研究所(上海200032)；廖美琳(上海市胸科医院)；丁嘉安(上海市第一肺科医院)
关键词：肺肿瘤；癌，非小细胞肺；PCR；基因，p15；染色体缺失
肿瘤990101 目的 探讨MTS2/p15基因缺失与人体非小细胞肺癌(NSCLC)的发生及发展的相关性。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)技术，分别检测160例不同病理类型及分期的肿瘤组织，10例非癌性肺组织及2例胎肺组织中p15基因的纯合性丢失。 结果 160例NSCLC组织中p15基因的丢失率以腺癌为最高64.7%，鳞癌其次43.9%，混合型鳞腺癌为最低37.0%，10例非癌性肺组织及2例胎肺组织均未见有p15基因的丢失。经TNM分期分析表明，Ⅰ期p15基因丢失率为34.6%，Ⅱ期为47.4%，Ⅲ期为61.4%，Ⅲ期的p15丢失率明显高于Ⅰ期(P<0.005)。 结论 MTS2/p15基因缺失除与NSCLC的发生相关外，还可能涉及到患者病程的进展。
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HOMOZYGOUS DELETION OF MTS2/p15 GENE IN
PRIMARY NON-SMALL CELL LUNG CARCINOMA
Xu Kaili,Liao Meilin,Ding Jiaan,et al.Shanghai Cancer Institute,Shanghai,200032
Objective：To investigate the relationship between clinicopathologic feature and homozygous deletion of p15 gene in non-small cell lung cancer.Methods：160 cases with non-small cell lung cancer,10 cases with benign lung diseases and 2 cases with fetal lung tissues were examined by polymerase chain reaction-based analysis for homozygous deletion of MTS2/p15 gene.Results：The rate of p15 gene deletion was 49.3% in non-small cell lung cancer,including 64.7% in adenocarcinoma,43.9% in squamous carcinoma and 37.0% in mixed adeno-squamous carcinoma,but none of p15 gene deletion occured in benign lung diseases and fetal lung.Interestingly,there was a relationship between the stage of clinical pathology and the rate of p15 gene deletion.Among them,the rate of p15 gene deletion in NSCLC was 34.6% in stage Ⅰ,47.4% in stage Ⅱ and 61.4% in stage Ⅲ (P<0.05).Conclusion：A lack of p15 gene was observed frequently in adenocarcinoma than in squamous cell carcinoma and was found to be closely related to clinical stages of NSCLC.
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Key words Lung neoplasms Carcinoma,non-small cell lung PCR Genes MTS2/p15 Chromosome deletion
癌基因的激活和抑癌基因的失活与恶性肿瘤的发生之间的相关性，现已成为肿瘤分子生物学研究的热点。通过人体肺癌的发生及发展的细胞遗传学并结合分子生物学研究，已充分揭示肿瘤细胞中多对染色体上频繁发生丢失，如3p，4p,5p,9p,11p,13p和17p,其中以3p，9p和17p尤为突出。最近，人们从染色体9p21区域处分离出两个细胞周期素依赖性激酶抑制因子的新成员，p16(MTS1)和p15(MTS2)基因，并发现p16基因丢失可能与家族性人体黑素瘤演变相关[1，2]。继后，在多种肿瘤细胞株和原发性肿瘤中相继观察到p15、p16基因发生纯合性丢失，从而提示p15、p16基因可能为人体多种肿瘤发生相关的抑癌基因。近年文献报道人体肺癌细胞株及原发性非小细胞肺癌中p16基因均可发生变异，并与NSCLC患者病程进展相关[3～8]。然而，对于人体原发性NSCLC手术标本中p15基因的丢失仍少见报道。为此，本文采用PCR法，检测及分析上海地区经病理证实的160例NSCLC组织中p15纯合性丢失，以期比较研究NSCLC病理分型及临床分期与p15基因丢失的相关性。
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材料与方法
一、组织标本来源
组织标本分别来自上海市胸科医院，上海市第一肺科医院，华东医院。新鲜手术切除标本在1小时内存放于液氮保存。经病理证实的160例非小细胞肺癌组织(其中包括鳞癌82例，腺癌51例及混合性鳞腺癌27例)，10例非癌肺疾患组织及2例胎肺组织，在作DNA大分子纯化前均放于液氮条件下冻存。
二、主要试剂
琼脂糖(Promega公司)，dNTP，Taq酶及DNA标准分子量Marker(华美公司)。p15 Exon 2及β-actin引物均由中科院细胞生物学研究所合成。
三、DNA纯化及PCR扩增
(一)DNA纯化 参照Maniatis法分别纯化各种组织DNA大分子，经紫外分光光度计作DNA定量检测。
, 百拇医药
(二)PCR扩增及p15基因外显子(Exon 2)丢失检测
1.PCR反应总体积为50 μl，样本DNA量为4 μl，94℃变性5 min后，进行35个循环，条件为94℃，30 s；55℃，30 s；72℃，30 s，扩增p15基因的外显子(Exon 2)。p15基因Exon 2引物序列如下：
sense 5′-TGGCTCTGACCACTCTGC
antisense 5′-AGCGAATTCGGGTGGGAAATTGGGGTAAGAA
同时用β-actin基因作为内对照，扩增条件：94℃变性5 min后，进行35个循环，条件为：94℃，30 s；55 ℃，2 min，72℃，3 min。
β-actin引物序列为：
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sense 5′-GAAACTACCTTCAACTCCATC
antisense 5′-CTAGAAGCATTTGCGGTGGACGATGGAGGGGCC
2.PCR扩增产物电泳检测：
p15基因外显子2及β-actin经PCR扩增后，产物在1.5%琼脂糖凝胶条件下进行电泳，凡检测标本中出现β-actin基因条带而p15基因条带消失者为纯合性丢失，两者均呈现条带为无丢失。
四、统计学分析：组间均值比较用t检验。
结 果
一、NSCLC组织病理分型及TNM分期：
本文收集原发性非小细胞肺癌组织总共为160例，其组织学分类及TNM临床分期(见表1)。
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表1 原发性NSCLC组织的病理分型及临床分期 分期
鳞癌
腺癌
混合型鳞腺癌
合计
Ⅰ
25
20
7
52
Ⅱ
18
11
, 百拇医药
9
38
Ⅲ
39
20
11
70
合计
82
51
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160
二、不同组织病理类型中p15基因纯合性丢失
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采用PCR法分别对160例原发性NSCLC，10例非癌性肺疾患以及2例胎肺组织纯化其大分子DNA，作p15基因(外显子2)及内对照β-actin的基因扩增检测。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，可观察到p15基因产物分子量为291 bp以及β-actin基因分子量为285 bp(见附图)。经上述标本检测结果提示160例NSCLC中79例出现p15基因纯合性丢失，总丢失率为49.3%，其中以腺癌为最高，丢失率达64.7%(33/51)，鳞癌为43.9%(36/82)，而混合型鳞腺癌为37.0%(10/27)，10例非癌性肺癌疾患及2例胎肺均未见有丢失(见表2)。表2 不同病理分型的NSCLC及非癌肺组织中p15基因纯合性丢失 分型
例数
p15纯合性丢失
例数
百分数
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腺癌
51
33
64.7
鳞癌
82
36
43.9
混合型鳞腺癌
27
10
37.0
总计
, 百拇医药 160
79
49.3
非癌性肺疾患
10
0
0
胎肺
2
0
0
附图 PCR法检测非小细胞肺癌组织中p15基因丢失
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M 分子量，1正常肺组织，2～7号均为NSCLC，其中2，5，7号标本出现p15基因丢失
三、NSCLC的TNM分期与p15基因纯合性丢失的相关性研究
根据WHO标定之NSCLC中TNM分期，本文中160例NSCLC中Ⅰ期为52例，Ⅱ期为38例及Ⅲ期为70例，经PCR扩增检测NSCLC各TNM分期中p15基因丢失率，结果表明Ⅰ期丢失率为34.6%(18/52)，Ⅱ期为47.3%(18/38)，而Ⅲ期为61.4%(43/70)，从而证实NSCLC患者TNM分期与p15基因纯合性丢失呈正相关。晚期患者(Ⅲ期)中p15基因丢失率明显高于早期患者(Ⅰ期)，经统计学处理两者有显著性差异(P<0.005)(见表3)。
表3 p15基因在160例不同临床分期的NSCLC中纯合性丢失 分期
例数
, 百拇医药
p15基因丢失
例数
百分数
Ⅰ期
52
18
34.6
Ⅱ
38
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47.3
Ⅲ
70
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61.4*
*P<0.005
讨 论
近20年来，随着肿瘤分子生物学的深入研究，使人们充分地认识到正常细胞向肿瘤细胞演变的基础，在于细胞内某些癌基因的激活及抑癌基因的失活。因此，当前人们不但要进一步寻找某些与肿瘤相关的新的基因，同时还需深入探讨某些已知基因在各种肿瘤发生及发展中的作用。 1994年以来，p16，p15基因分别从人体染色体9p21-22区处分离及纯化，并发现该基因属CDK4和CDK6(cyclin-dependent kinase)的抑制因子，称为MTS1及MTS2。基因表达产物可与CDK4-cycline D复合物结合，使CDK4激活功能丧失，阻滞细胞进入G1/S期，抑制细胞生长。经采用PCR及Southern印迹法分析已充分证实p16基因在黑素瘤、神经胶质瘤、肺癌、食管癌、白血病和卵巢癌中存在缺失。显然缺失p16，p15基因均可促使细胞无限制地进入G1/S期并加快细胞分裂，最终导致细胞永生化而形成肿瘤细胞。
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1995年，Washimi等人[3]采用PCR及PCR-SSCP法，首次证实非小细胞肺癌细胞株及原发性非小细胞肺癌组织均可出现p16、p15基因的纯合性丢失，但在小细胞肺癌细胞株中却未见丢失。鉴于该两基因影响细胞分裂的功能主要是通过Rb基因，而小细胞肺癌中Rb基因均出现突变型，因而小细胞肺癌的演变有可能与p16，p15基因的缺失无关。本文拟通过PCR法检测上海地区不同病理分型及分期的160例非小细胞肺癌组织中p15基因的纯合性丢失，以期阐明中国人肺癌发生及发展与p15基因变异之间的相关性，实验研究结果提示160例NSCLC中出现p15基因总纯合性丢失率可达49.3%，而10例非癌性肺疾患及2例胎肺组织中均未见有丢失，从而证实NSCLC演变与p15基因的丢失密切相关。经病理组织类型分析表明腺癌中p15基因丢失率为最高，达64.7%，其次为鳞癌，43.9%，而混合型鳞腺癌为最低，37.0%。肿瘤病因学资料提示肺鳞癌的发生与吸烟相关，而腺癌与吸烟关系不大，因而p15基因的缺失与吸烟及其它因素之间的相关性研究，尚须今后深入探讨。
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据文献探讨p15、p16基因产物可起到比p53基因更为有效的一种控制癌细胞分裂的“闸”的作用，因而在癌细胞中出现p15、p16基因的丢失，必然可导致细胞分裂速率增加及促进癌细胞的转移。Kratzke等人[4]曾观察到NSCLC手术标本中出现p16基因的纯合性丢失均与患者预后差密切相关。Kelly[6]等更进一步发现来自于Ⅲ及Ⅳ期之NSCLC细胞株中明显出现p16基因的纯合性丢失，而Ⅰ，Ⅱ期却少见p16基因丢失。这与本文的实验结果完全相符，p15基因的纯合性丢失频率与肺癌的分期相关，其中Ⅰ期为34.6%，Ⅱ期为47.4%，而Ⅲ期可高达61.4%，Ⅲ期明显地高于Ⅰ期并具有极其显著性的差异(P<0.005)。最近，Taga等人[8]采用免疫组化法，检测115例NSCLC标本中p16基因产物表达的阴性率明显与预后相关(P<0.043)，其中早、中期的患者之间差异最为明显(P<0.039)。由此可见，通过检测原发性NSCLC组织标本中p16，p15基因的缺失在一定程度上可反映患者的病程，并有可能为今后直接应用于临床，作为一种预测NSCLC患者预后的肿瘤标志。
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然而，尽管人们普遍认为p16基因与p15基因两者在NSCLC中可出现共同丢失的现象[7]，但考虑到该两种基因在各种肿瘤类型中存在不同的变异[9]，因此两者之间在NSCLC发生及发展中功能的差异还有待于深入探讨和研究。
上海市医学领先学科 上海市科委资助课题
第一作者简介 许凯黎，男，大学本科，研究员，硕士生导师。
参 考 文 献
1 Kamb A,Gruis A,Feldhaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science,1994,264(15):436
2 Hussussian CT,Rinder LK,Daik DF, et al. Germline p16 mutations in familiar melanoma.Nature Genet,1994,8:15
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3 Washimi O,Nagatake M, Osada H, et al. In vivo occurrence of p16(MTS1) and p15(MTS2) alterations preferentially in non-small cell lung cancers.Cancer Res,1995,55:514
4 Kratzke RA,Greatens TM,Rubins JB,et al. RB and p16INK4a expression in resected non-small cell lung cancer.Cancer Res,1996,56:3415
5 钟晓松，许凯黎，廖美琳，等.原发性非小细胞癌p15基因的丢失研究.肿瘤.1997，17(2)：81
6 Kelley MJ,Nakagawa K, Steinberg SM, et al. Differential inactivation of CDK2 an RB protein in non-small cell lung cancer cell lines.J Natl Cancer Inst,1995,87(10):756
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7 Okamotot A,Hussain SP,Hagiwara K, et al. Differential inactivation of CDK2 an RB protein in non-small cell lung cancer cell lines.J Natl Cancer Inst,1995,87(10):756
8 Taga S,Osaki T,Ohgami A, et al. Prognostic value of the immunohistochemical detection of p16INK4 expression in nonsmall cell lung carcinoma.Cancer,1997,80(3):389
9 Herman GJ, Jen J,Merlo A,Baylin SD.Hypermethylation-associated inactivation indicates a tumor suppressor for p15INK4B1.Cancer res,1996,56:722
(收稿：1998-10-16), http://www.100md.com